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單純皰疹病毒2型糖蛋白G的基因擴增、克隆及其B細胞抗原表位分析
【關鍵詞】 單純皰疹病毒2型；包膜糖蛋白G
Gene cloning and B cell antigen epitope analysis of HSV2 glycoprotein G
【Abstract】 AIM: To clone fulllength glycoprotein G (gG2) gene of herpes simplex virus type Ⅱ(HSV2) and make a forecast to B cell antigen epitope of gG2. METHODS: The gG2 gene of HSV2 amplified by PCR was ed into pGEMT carrier, then transected into E.coli DH5α cells for sequencing. Then, B cell antigen epitope was analyzed by Lasergene, Clustal X softwares. RESULTS: We have cloned fulllength gG2 gene of HSV2. By making an analysis to B cell epitope of gG2, we found that the homology in Nterminal of gG1 and gG2 genes of HSV was very low. B cell antigen epitope of gG2 of HSV2 showed a very high antigen index in "peculiarity domain". CONCLUSION: The successful cloning of fulllength gG2 of HSV2 and a successful forecast to B cell epitope of gG2 provide evidences and references for developing diagnostic kits for herpes virus infection and finding better target sites of HSV2 vaccine.
【Keywords】 herpes simplex virus type Ⅱ; glycoprotein G2; genes cloning; epitope
【摘要】 目的：克隆單純皰疹病毒2型（HSV2）糖蛋白G2(gG2)全長基因并對糖蛋白G2進行B細胞抗原表位預測. 方法：用PCR法擴增HSV2的gG2基因，連接到pGEMT載體，轉化大腸桿菌DH5α株后測序. 利用Lasergene，Clustal X等軟件，進行B細胞抗原表位預測. 結果：完成單純皰疹病毒2型（HSV2）gG2全長基因克隆. 通過B細胞抗原表位分析，發現HSV1的gG1和HSV2的gG2氨基端的同源性很低. gG2蛋白在“獨特區”存在抗原指數非常強的抗原表位. 結論：成功構建單純皰疹病毒2型（HSV2）gG2全長基因克隆，為單純皰疹病毒感染的診斷試劑的研發及抗單純皰疹病毒疫苗研究尋找更好的靶位點提供研究材料和參考.
【關鍵詞】 單純皰疹病毒2型；包膜糖蛋白G2；基因克��；抗原表位
0引言
單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）是引起人類病毒性疾病中常見的病毒之一，可分為HSV1和HSV2兩種血清型. HSV2型主要感染外生殖器和軀干下部皮膚，引起生殖器皰疹、新生兒皰疹. 目前認為與生殖器惡性腫瘤相關，并增加了AIDS的感染機會［1］. HSV2病毒顆粒中至少有11種包膜糖蛋白，其中gG2為型特異性抗原［2］，在單純皰疹2型病毒診斷、分型和疫苗研究中起到重要作用. 我們對HSV2 的gG2基因進行克隆，并利用生物信息學軟件對gG2基因進行B細胞抗原表位分析，為gG2蛋白作為診斷試劑和疫苗研究打下基礎.
1材料和方法
1.1材料HSV2病毒株由本課題組在廣東地區單純皰疹感染患者中分離培養并感染于Vero細胞中保存，Vero細胞、DH5α細胞由本實驗室保存. DNAzsolE， DNA純化試劑盒購自申能博采公司，ExTaq酶、dNTP購自TaKaRa公司，pGEMT載體購自Promega公司.
1.2方法
1.2.1引物設計根據GenBank提供的HSV2病毒（Genbank access number: Z86009）基因組全序列，利用LasergenePrimerSelect軟件設計引物. 上游的引物序列是5′AAGCTTACCTTGCCGCCCGGCGTCA3′；下游的引物序列是5′GCGGCCGCTTATCGTGGACATTTGGTCG3′. 引物由上海博亞生物技術有限公司合成.
1.2.2DNA提取采用DNAzsolE從HSV2病毒Vero細胞培養上清中提取DNA.
1.2.3gG2基因的擴增使用TaKaRa公司ExTaq酶進行PCR. 反應液包括：2.5 mmol的dNTPs 3 μL，10×PCR buffer 3 μL，上游引物1 μL，下游引物1 μL，ExTaq 0.5 μL，cDNA模板5 μL，H2O 16.5 μL，總體積30 μL. 反應條件：94℃，2 min；94℃，30 s，55℃，1 min，72℃，2 min，30個循環；72℃ 8 min，4℃保存.
1.2.4基因克隆使用申能博采公司DNA純化試劑盒回收PCR產物，將回收產物與pGEMT載體連接， 4℃放置12 h. 將重組載體轉化DH5α感受
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